| 苦荞细胞色素CYP81家族同源基因FtP450-R4的克隆、分子鉴定及其功能分析 |
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| 引用本文： | 李成磊,赵海霞,温国琴,周婧,孙家宜,姚攀峰,陈惠,王安虎,吴琦.苦荞细胞色素CYP81家族同源基因FtP450-R4的克隆、分子鉴定及其功能分析[J].农业生物技术学报,2015,23(2). |
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| 作者姓名： | 李成磊 赵海霞 温国琴 周婧 孙家宜 姚攀峰 陈惠 王安虎 吴琦 |
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| 作者单位： | 1. 四川农业大学生命科学学院,雅安,625014
2. 西昌学院,西昌,615000 |
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| 摘 要： | 细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)是高等植物中最大的酶蛋白家族之一,广泛参与植物的次生代谢和抗逆生理.本研究采用同源克隆和cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNAends,RACE)技术,获得苦荞(Fagopyrum tataricum) CYP81家族同源基因FtP450-R4 (GenBank登录号:KM271986).FtP450-R4 cDNA全长1770bp,5'-UTR为49 bp,3'-UTR为194bp,ORF为l 527 bp,其ORF序列可编码508个氨基酸残基的蛋白.生物信息学分析表明,FtP450-R4蛋白通过N-端4～24位氨基酸残基定位于内质网,与F3'H (flavonoid 3'-hydroxylase)、I2'H (isoflavone 2'-hydroxylase)和其他CYP450的同源性在44％～46％之间;多重序列比对显示,FtP450-R4具有CYP450中经典的基序和保守序列,但不含F3'H的特征基序(GGEK);系统进化树分析显示,FtP450-R4与拟南芥(Arabidopsis thaliana) CYP81家族和I2'H聚为一大簇,说明其可能参与苦荞黄酮类化合物的羟化或对逆境胁迫的应答.UV-B、寒冷和干旱均能引起FtP450-R4在苦养子叶中表达量的显著变化,而在胚轴中其表达量变化不显著.利用大肠杆菌(Escherchia coli) BL21 (DE3)菌株对FtP450-R4蛋白进行了可溶性表达,活性鉴定表明,重组FtP450-R4蛋白能以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, NADPH)和山奈酚为底物进行酶促反应,具有生物学活性.本研究可为了解CYP450在黄酮合成代谢中的功能,明确苦荞黄酮代谢调控的分子机制提供了基础资料.
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| 关 键 词： | 苦荞 细胞色素P450 克隆 分子鉴定 活性鉴定 |
Molecular Cloning,Characterization and Functional Analysis of a Cytochrome CYP81 Family Homologous Gene FtP450-R4 from Fagopyrum tataricum |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fagopyrum tataricum Cytochrome P450 Cloning Molecular characterization Activity identification |
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