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| 牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达 | |
| 引用本文： | 路伟,张鹏,张杰,刘永生,卫广森,陈豪泰,姜海霞,朱小玲.牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达[J].中国预防兽医学报,2007,29(4):277-281. |
| 作者姓名： | 路伟 张鹏 张杰 刘永生 卫广森 陈豪泰 姜海霞 朱小玲 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046;沈阳农业大学,辽宁,沈阳,110161 2. 辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁,沈阳,110161 3. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046 4. 甘肃农业大学,动物医学院,甘肃,兰州,730070 |
| 基金项目： | 甘肃省科技攻关项目;甘肃省自然科学基金;中国博士后科学基金 |
| 摘 要： | 利用PCR技术，从含有牛朊蛋白（Prion protein，PrP）基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp—T中扩增出约420bp的目的基因（PrP猢基因）。将PrP^27-30基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NotⅠ进行双酶切，T4DNA连接酶作用后，转化至E．coli JM109中，构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^27-30。pPIC9K-boPrP^27-30经限制性核酸内切酶SalⅠ线性化后电转至毕赤酵母GS115中，经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115／pPIC9K-boPrP^27-30。GS115／pPIC9K-boPrP^27-30经1．0％甲醇诱导后，表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明牛PrP^27-30基因在毕赤酵母细胞中获得表达，表达产物的分子量约为27Ku，能够被单克隆抗体SAF-70识别。 |
| 关 键 词： | 牛PrP27-30基因 克隆 表达 |
| 文章编号： | 1008-0589（2007）04-0277-04 |
| 收稿时间： | 2006-06-20 |
| 修稿时间： | 2006年6月20日 |
Cloning and expression of bovine prion protein 27-30 gene |
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| LU Wei,ZHANG Peng,ZHANG Jie,LIU Yong-sheng,WEI Guang-sen,CHEN Hao-tai,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling.Cloning and expression of bovine prion protein 27-30 gene[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2007,29(4):277-281. | |
| Authors: | LU Wei ZHANG Peng ZHANG Jie LIU Yong-sheng WEI Guang-sen CHEN Hao-tai JIANG Hai-xia ZHU Xiao-ling |
| Abstract: | A 420 bp PrP^27-30 gene fragment of the bovine Prop gene was amplified by PCR from plasmid BoPmp-T containing the ORF of bovine Prop gene. The PCR product was cloned into pPIC9K vector to produce recombinant plasmid pPIC9K-boPrP^27-30 and transformed into E.coli JMI09. The pPIC9K-boPrP^27-30 was linearized with Sal I and then transfected into Pichia Pastoris GS115 by electroporation. A recombinant sWain GS115/pPIC9K-boPrP^27-30 was obtained by G418 selection. Expression of the recombinant PrP was induced with 1.0 % methanol and the expression products were identified by SDS-PAGE and Western blot analysis. The results demonstrated that bovine PrP^27-30 gene was successfully expressed in Pichia Pastoris as a 27 Ku protein that could be specifically recognized by monoclonal antibody SAF-70. |
| Keywords: | bovine PrP^27-30 gene cloning expression |
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