| 猪流行性腹泻病毒黑龙江分离株ORF3基因的克隆、表达及分子进化分析 |
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| 引用本文： | 邹德华,郑亮,程丽鑫,李兴志,张雅婷,徐嘉欣,武雪宁,张华,曹宏伟.猪流行性腹泻病毒黑龙江分离株ORF3基因的克隆、表达及分子进化分析[J].黑龙江八一农垦大学学报,2018(3). |
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| 作者姓名： | 邹德华 郑亮 程丽鑫 李兴志 张雅婷 徐嘉欣 武雪宁 张华 曹宏伟 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院 |
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| 摘 要： | 克隆2017年黑龙江省大庆地区流行PEDV毒株(HLJ/DQ/2017)ORF3基因,通过真核表达及分子进化分析方法,为研究ORF3蛋白生物学功能提供重要的实验基础。TRIzol裂解法提取病毒RNA,RT-PCR技术扩增ORF3基因片段并测序,克隆至p EGFP-N1载体上,转染至HeLa细胞。应用DNAStar、DNAMAN、MEGA5.0软件进行序列比对和发育树绘制,应用Western Blot技术、Immunofluorescence技术检测ORF3蛋白的表达和细胞定位。经过酶切和测序验证p EGFP-N1载体中正确插入了ORF3基因,Western Blot法、Immunofluorescence法证实ORF3-EGFP融合蛋白聚集成核表达在HeLa细胞质的局部,由进化树分析显示,该毒株和2015年黑龙江地区流行的两个株毒株(HLJ/2015/116、HLJ/2015/DP1-1)位于同一群,但相比2011年黑龙江地区爆发的毒株(CH/HLJ/HH-2/2011),前者亲缘关系更近一些。融合蛋白ORF3-EGFP在HeLa细胞中聚集成核表达,遗传进化分析表明,该毒株与2015年黑龙江省流行的PEDV毒株相比无较大变异,且为目前世界最为流行的PEDV毒株类型。
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