| 基于猪流行性腹泻病毒变异毒株重组全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法的建立及应用 |
| |
| 引用本文： | 牟一娇,于瑞明,张莉萍,王永录.基于猪流行性腹泻病毒变异毒株重组全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法的建立及应用[J].中国畜牧兽医,2023(3):1185-1194. |
| |
| 作者姓名： | 牟一娇 于瑞明 张莉萍 王永录 |
| |
| 作者单位： | 1. 中农威特生物科技股份有限公司;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| |
| 基金项目： | 国家生猪产业体系项目(CARS-35)； |
| |
| 摘 要： | 【目的】建立一种猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的IgA抗体ELISA检测方法。【方法】以PEDV流行株CH/HNPJ/2017(MF152604.1)为生物材料，通过RT-PCR扩增出S2基因(2 368—4 170 bp),并将其插入到原核表达载体pET-24a中，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，利用IPTG诱导表达，经镍柱纯化。Western blotting验证重组蛋白S2与PEDV阳性血清的反应原性和特异性。将其作为包被抗原，建立一种基于PEDV变异毒株重组全长S2蛋白的IgA抗体ELISA方法，用棋盘法确定该方法的最优检测条件，对其敏感性、特异性和重复性进行测定，并初步应用于130份猪血清和40份猪口腔黏液的检测。【结果】通过RT-PCR方法扩增出S2基因，成功构建重组表达载体pET-24a-S2,转化大肠杆菌经诱导表达纯化后获得重组S2蛋白。SDS-PAGE结果显示，纯化的S2蛋白条带特异且无杂带；Western blotting试验表明该蛋白与PEDV阳性猪血清具有良好的反应性。ELISA方法反应条...
|
| 关 键 词： | 猪流行性腹泻 S2蛋白 IgA抗体 ELISA |
|
|
