| 溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 宋越,苏胜杰,张帆,白帆,戴伶俐,王娜,王大伟,杨茜雯,赵世华,张月梅.溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2023(6):2479-2486. |
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| 作者姓名： | 宋越 苏胜杰 张帆 白帆 戴伶俐 王娜 王大伟 杨茜雯 赵世华 张月梅 |
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| 作者单位： | 1. 内蒙古自治区农牧业科学院;2. 内蒙古自治区动物疫病预防控制中心;3. 通辽市动物疫病预防控制中心;4. 辽宁省农业经济学校 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(31902305)；;内蒙古自治区自然科学基金项目(2022MS03069)；;内蒙古自治区科技计划项目(2022YFHH0141)； |
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| 摘 要： | 【目的】构建溶血性曼氏杆菌截短型白细胞毒素(LktA)原核表达系统，表达融合蛋白并进行纯化和鉴定，为溶血性曼氏杆菌检测方法的建立提供物质基础。【方法】设计并合成特异性引物，PCR扩增羊溶血性曼氏杆菌lkta截短基因；用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ对PCR产物和pET-28b(+)载体进行双酶切，用T4 DNA连接酶将溶血性曼氏杆菌lkta截短基因克隆到pET-28b(+)载体；使用IPTG诱导融合蛋白LktA的表达。通过Ni2+亲和层析纯化后采用SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行鉴定。用融合蛋白LktA免疫4月龄健康雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体，4次免疫完成后进行抗体效价测定。【结果】测序结果表明，构建的表达载体中溶血性曼氏杆菌lkta基因序列正确；融合蛋白LktA的分子质量约为30 ku,在大肠杆菌中高效表达并以包涵体形式存在，在变性条件下纯化融合蛋白LktA电泳图显示条带单一，确定其纯度>90%;纯化的融合蛋白LktA可与His抗体进行特异性结合。将纯化的融合蛋白LktA免疫新西兰大白兔后成功制备出多克隆抗体，抗体效...
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| 关 键 词： | 截短型蛋白 原核表达载体 毒力因子 致病机理 |
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