| 鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7蛋白的原核表达及SIgA抗体间接ELISA检测方法建立 |
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| 引用本文： | 侯玉凤,苏晓彤,张秋婷,孙明杰,陈甜甜,谢全喜,谷巍,王红.鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7蛋白的原核表达及SIgA抗体间接ELISA检测方法建立[J].中国畜牧兽医,2023(8):3325-3335. |
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| 作者姓名： | 侯玉凤 苏晓彤 张秋婷 孙明杰 陈甜甜 谢全喜 谷巍 王红 |
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| 作者单位： | 山东宝来利来生物工程股份有限公司山东省动物微生态制剂重点实验室 |
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| 摘 要： | 【目的】建立检测鸡肠道黏膜柔嫩艾美耳球虫SIgA抗体的间接ELISA检测方法以期对鸡柔嫩艾美耳球虫特异性黏膜免疫水平进行评价。【方法】将鸡柔嫩艾美耳球虫EtMIC2和SO7基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体，构建EtMIC2-SO7重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达后，通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。采用镍柱亲和层析法对EtMIC2-SO7重组蛋白进行纯化，用Bradford法测定蛋白浓度。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，通过方阵滴定法，确定ELISA检测抗原、待检黏膜的最佳工作浓度，通过单一变量法确定最佳待检黏膜孵育时间、封闭液种类、酶标二抗、显色液工作条件，参照ELISA抗体检测试剂盒阴阳性判定标准，以S/P≥0.4为阳性，S/P<0.4为阴性作为黏膜样品阴阳性判定标准，对ELISA检测方法的重复性、特异性、敏感性进行验证并与鸡柔嫩艾美耳球虫全蛋白包被ELISA板检测结果进行符合率比较。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示，获得大小约70 ku的EtMIC2...
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| 关 键 词： | 鸡柔嫩艾美耳球虫 分泌型免疫球蛋白A(SIgA) ELISA |
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