| 红嘴鸥TLR7蛋白多克隆抗体制备及在DF-1细胞中的表达特征分析 |
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| 引用本文： | 任胜杰,申宏利,项勋,代飞燕,朱茂银,邬佳莉,胡志辉,段纲,常华.红嘴鸥TLR7蛋白多克隆抗体制备及在DF-1细胞中的表达特征分析[J].中国畜牧兽医,2023(7):2865-2875. |
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| 作者姓名： | 任胜杰 申宏利 项勋 代飞燕 朱茂银 邬佳莉 胡志辉 段纲 常华 |
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| 作者单位： | 云南农业大学动物医学院 |
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| 摘 要： | 【目的】制备红嘴鸥Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)蛋白多克隆抗体，分析红嘴鸥TLR7蛋白在DF-1细胞中的表达特征，为深入了解红嘴鸥TLR7蛋白功能及作用机制提供材料。【方法】设计引物扩增红嘴鸥TLR7基因CDS区，并构建其原核表达载体与真核表达载体。将重组原核表达质粒pET32a-TLR7转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞进行重组蛋白体外诱导表达，并对其诱导温度、诱导时间和IPTG浓度进行优化筛选。选用新西兰大白兔制备多克隆抗体，采用间接ELISA法检测血清抗体价效，利用Western blotting鉴定抗体特异性。将真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7转染至DF-1细胞中过表达，利用间接免疫荧光技术检测红嘴鸥TLR7蛋白在转染DF-1细胞后不同时间点的表达特征。【结果】红嘴鸥TLR7基因CDS区长约1 182 bp,双酶切结果显示出2组大小不同的2条片段，分别为5 900、1 182 bp(原核表达载体)和5 428和1 182 bp(真核表达载体),测序后表明原核表达载体与真核表达载体构建成功。体外诱导温度为30℃、IPT...
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| 关 键 词： | 红嘴鸥 TLR7蛋白 多克隆抗体 DF-1细胞 表达 |
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