| 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 欧云文,潘琴,汪洋,代军飞,任绍科,张洋,张杰.猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2023(6):2487-2495. |
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| 作者姓名： | 欧云文 潘琴 汪洋 代军飞 任绍科 张洋 张杰 |
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| 作者单位： | 1. 开江县动物疫病预防控制中心;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;3. 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室 |
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| 基金项目： | 四川省科技计划资助项目(2023 JDRC0126)； |
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| 摘 要： | 【目的】原核截短表达猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6,PPV6)ORF2基因，并制备PPV6 VP1((348 aa-675 aa))蛋白多克隆抗体，为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板，PCR扩增获得ORF2截短基因片段，将其克隆至原核表达载体pET30a(+)中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达，Ni-NTA树脂亲和层析纯化，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化，免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体，采用Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体，原核截短表达了PPV6 VP1((348 aa-675 aa))蛋白；SDS-PAGE结果显示，重组PPV6 VP1(
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| 关 键 词： | 猪细小病毒6型(PPV6) ORF2基因 截短表达 多克隆抗体 |
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