| 携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 刘家兴,韩雪英,张鑫茹,邓嘉昕,姚伦广,刘阳坤.携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒制备与免疫原性分析[J].中国畜牧兽医,2023(4):1567-1574. |
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| 作者姓名： | 刘家兴 韩雪英 张鑫茹 邓嘉昕 姚伦广 刘阳坤 |
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| 作者单位： | 1. 南阳师范学院生命科学与农业工程学院河南省畜禽保健品工程技术中心;2. 西北农林科技大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(32002302、31870917)； |
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| 摘 要： | 【目的】制备携带猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)抗原表位的铁蛋白纳米颗粒，并评价其免疫原性，为PEDV的防控提供新的候选亚单位疫苗。【方法】将PEDV纤突蛋白S的COE和S1D区域设计成串联表位S1CD并进行密码子优化和合成，构建单独表达S1CD蛋白的重组质粒pET28a-S1CD及融合表达S1CD蛋白和铁蛋白亚基的重组质粒pET28a-S1CD-Ferritin,并在大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1CD、S1CD-Ferritin蛋白在大肠杆菌内是否正确表达，并通过透射电镜观察其形态结构。将纯化的S1CD-Ferritin蛋白免疫小鼠，同时以纯化的S1CD蛋白和PBS为对照，采用间接ELISA方法检测各组小鼠血清的S特异性抗体水平和γ-干扰素(IFN-γ)含量，通过中和试验测定中和抗体水平，分析重组蛋白在小鼠体内的免疫原性。【结果】成功构建了重组质粒pET28a-S1CD和pET28a-S1CD-Ferritin。SDS-PAGE结果显示，高效表达出了S1CD...
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| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 铁蛋白 纳米颗粒 原核表达 免疫原性 |
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