| 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 焦琳琳,成玉婷,吴庆国,吴双,吴植,朱善元,钱莺娟.鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2023(6):2395-2402. |
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| 作者姓名： | 焦琳琳 成玉婷 吴庆国 吴双 吴植 朱善元 钱莺娟 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室;2. 江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心 |
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| 基金项目： | 江苏省高等学校自然科学研究面上项目(22KJB230005)；;江苏省大学生创新创业训练计划项目(202112806011Y)； |
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| 摘 要： | 【目的】本研究选择原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)核衣壳蛋白(Capsid protein),并制备其多克隆抗体，为DTMUV分子机制研究奠定基础。【方法】根据DTMUV-201909株基因序列，运用一步克隆技术将Capsid基因克隆至表达载体pET-30a(+)中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，利用IPTG进行诱导表达，通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白；使用ISA206佐剂与纯化后的重组蛋白混合乳化后免疫BALB/c小鼠，以获得多克隆抗体。间接ELISA方法测定获得的多克隆抗体效价，并对多克隆抗体进行Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)验证。【结果】试验成功构建pET-30a-Capsid重组质粒，SDS-PAGE结果显示，表达的重组蛋白大小约为18 ku,主要以包涵体形式存在；Western blotting结果表明，该蛋白能与抗His标签鼠单克隆抗体发生特异性反应，具有良好反应原性。间接ELISA结果显示，制备的鼠抗Capisd蛋白多克隆抗体效价可达1...
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| 关 键 词： | 鸭坦布苏病毒(DTMUV) 核衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
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