| 基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体 |
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| 引用本文： | 马继福,阿德力·克坦,解津刚,巴合提·博代,李振伟,吾热力哈孜·哈孜汗.基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体[J].中国畜牧兽医,2023(5):2032-2043. |
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| 作者姓名： | 马继福 阿德力·克坦 解津刚 巴合提·博代 李振伟 吾热力哈孜·哈孜汗 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院;2. 新疆塔城地区动物疾病控制与诊断中心 |
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| 摘 要： | 【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库，并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体，以期制备出新型抑制素免疫制剂，为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白，并对诱导表达的INHα蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定；用Ni琼脂糖凝胶纯化后的INHα蛋白免疫新疆双峰驼。通过巢式PCR扩增制备骆驼噬菌体展示纳米抗体文库，通过三轮免疫亲和淘选及噬菌体ELISA从该文库中富集和筛选INHα特异性纳米抗体，并通过测序得知纳米抗体的基因序列；用蛋白-蛋白模拟对接初步鉴定该纳米抗体与INHα蛋白的亲和性。【结果】通过原核诱导表达及Ni琼脂糖凝胶纯化得到了大小为36 ku的INHα重组蛋白，通过Western blotting检测到约36 ku的蛋白条带；双峰驼通过6次INHα蛋白免疫抗体效价达到1∶1 024 000;通过巢式PCR获得了400 bp左右的VHH基因，通过电转化等试验构建了库容量为1.05×1012CFU的纳米抗体文库，文库阳...
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| 关 键 词： | 抑制素α亚基(INHα) 纳米抗体 噬菌体展示技术 |
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