| 德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 胡乐玉,胡欣瑶,李颖,赵盛淼,沈凤臻,王长法,李亮亮,王彤彤,任慧英.德州驴HO-1基因生物信息学分析及多克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医,2023(4):1499-1510. |
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| 作者姓名： | 胡乐玉 胡欣瑶 李颖 赵盛淼 沈凤臻 王长法 李亮亮 王彤彤 任慧英 |
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| 作者单位： | 1. 青岛农业大学动物医学院;2. 聊城大学农学与农业工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年项目(32002248)； |
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| 摘 要： | 【目的】克隆德州驴血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)基因，对其进行原核表达及多克隆抗体制备，同时检测HO-1基因在德州驴不同组织中的表达情况，为后期研究HO-1基因功能提供支撑材料。【方法】参考GenBank中公布的马HO-1基因序列(登录号：XM＿023631135.1)设计特异性引物，从驴原代肺泡巨噬细胞(donkey primary alveolar macrophages, DPAMs)中提取RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增HO-1基因编码区(coding sequences, CDS),对测序所获序列与其他物种进行相似性比对并构建系统进化树；应用多种在线软件对HO-1基因编码蛋白进行生物信息学分析。将HO-1基因序列克隆至pCold-SUMO载体进行原核表达，经镍柱亲和层析纯化后，以重组的HO-1蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，利用ELISA和Western blotting检测多克隆抗体特异性及与抗原结合的最大稀释度。利用免疫组化试验检测德州驴4种组织中HO-1蛋白的表达水平。【结果】德州驴HO-1基因CDS区全长873 bp,编码...
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| 关 键 词： | 德州驴 HO-1基因 原核表达 多克隆抗体 组织表达 |
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