| 猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定 |
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| 引用本文： | 李倬,郑其升,陈瑾,侯红岩,薛刚,侯继波.猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定[J].江苏农业学报,2012(1):92-98. |
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| 作者姓名： | 李倬 郑其升 陈瑾 侯红岩 薛刚 侯继波 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 |
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| 摘 要： | 为探明原核表达的重组猪IL-10对仔猪的免疫原性,根据GenBank公布的猪IL-10基因序列(登录号:L20001)设计并合成了扩增猪IL-10基因的引物。利用ConA刺激猪外周血淋巴细胞,通过RT-PCR扩增出pmIL-10完整基因及其成熟蛋白基因片段(pmIL-10),分别插入质粒pVAX1和pET32α(+),对猪IL-10基因进行原核与真核表达。利用纯化的重组蛋白免疫仔猪,制备抗血清,利用间接ELISA检测血清效价。将pVAX-pIL-10转染COS-7细胞,利用RT-PCR检测pmIL-10的转录,以间接免疫荧光(IFA)鉴定其与原核表达产物制备抗体之间的反应。结果显示:该试验成功获得了猪IL-10基因,重组菌pET-pmIL-10/Rosetta经IPTG诱导后,猪IL-10获得表达,目的蛋白表达量以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39.7%;以白油佐剂重组蛋白免疫仔猪可产生高水平的抗猪IL-10的抗体,经ELISA检测,P/N值可达到8,OD630吸光值可达1.875,该抗体与转染pVAX-pmIL-10的COS-7细胞发生明显的荧光反应,说明原核表达的重组猪IL-10免疫产生的抗体具有生物学活性,为日后利用猪IL-10抗体消除病毒感染中产生的内源性IL-10研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪IL-10 表达 抗体制备 疫苗佐剂 |
Expression of porcine interleukin-10 and identification of its immunogenicity |
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| LI Zhuo,ZHENG Qi-sheng,CHEN Jin,HOU Hong-yan,XUE Gang,HOU Ji-bo.Expression of porcine interleukin-10 and identification of its immunogenicity[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2012(1):92-98. |
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| Authors: | LI Zhuo ZHENG Qi-sheng CHEN Jin HOU Hong-yan XUE Gang HOU Ji-bo |
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| Institution: | 1(1.National Research Center for Veterinary Bio-products,Jiangsu Academy of Agricultural Science,Nanjing 210014,China;2.Key Laboratory of Animal Disease Diagnosis and Immunology,Ministry of Agriculture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine IL-10 expression antibody preparation vaccine adjuvant |
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