| 异色瓢虫丙酮酸激酶基因序列分析及其调控海藻糖代谢功能 |
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| 引用本文： | 葛欣竺,史宇星,王莎莎,刘智慧,蔡文杰,周敏,王世贵,唐斌.异色瓢虫丙酮酸激酶基因序列分析及其调控海藻糖代谢功能[J].中国农业科学,2021,54(23):5021-5031. |
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| 作者姓名： | 葛欣竺 史宇星 王莎莎 刘智慧 蔡文杰 周敏 王世贵 唐斌 |
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| 作者单位： | 杭州师范大学生命与环境科学学院,杭州 311121 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2017YFD0201006);杭州市农业/社会发展主动设计项目(20190101A01);杭州师范大学2020-2021学年“本科生创新能力提升工程”(CX2020126);杭州师范大学2020年星光计划 |
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| 摘 要： | 【目的】丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PYK）是一种调节性糖酵解酶,负责调节糖酵解和糖异生之间的平衡,具有重要的生理作用。本研究通过分析异色瓢虫（Harmonia axyridis）3条HaPYK的序列结构,并结合RNA干扰（RNAi）技术,探讨HaPYK在瓢虫体内的生物学功能。【方法】基于从异色瓢虫全基因组中获得的3条HaPYK序列（被分别命名为HaPYK1-1、HaPYK1-2、HaPYK2）,通过生物信息学方法分析其理化性质和序列结构,以及与其他昆虫之间的同源性。然后采用显微注射的方法将体外合成的dsRNA导入羽化第1天成虫体内,在注射后48和72 h分别收集试验材料,提取虫体总RNA后进行反转录,随后采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术测定3个HaPYK的表达水平以评估RNAi效果,并检测与海藻糖代谢相关基因的表达水平,最后检测葡萄糖、糖原、海藻糖含量以及两种海藻糖酶的活性。【结果】HaPYK1-1、HaPYK1-2、HaPYK2的开放阅读框分别为1 350、1 569、1 656 bp;蛋白大小分别为449、522、551 aa,理论等电点分别为5.04、5.02、5.01。保守结构域预测表明3条HaPYK均属于Pyruvate_kinase超家族。HaPYK二级结构主要是α-螺旋和无规则卷曲,另外也含有延伸链和β-转角。3条序列的寡聚物类型均为同源四聚体。系统进化树显示,HaPYK与同为鞘翅目的昆虫具有较近的亲缘关系,如马铃薯甲虫（Leptinotarsa decemlineata）和赤拟谷盗（Tribolium castaneum）。注射dsHaPYK1-1后,HaPYK1-2和HaTRE1-4的表达量显著下调,而HaPYK2、HaTRE1-1、HaTRE1-2、HaTRE2-like、HaTPS的表达量显著上调;注射dsHaPYK1-2后,HaTRE1-1、HaTRE1-2、HaTRE1-3、HaTRE1-5、HaTRE2、HaTPS的表达量显著上调;注射dsHaPYK2后,仅HaTRE1-1表达量在48 h表现为显著上调,HaTRE1-3、HaTRE1-4、HaTRE1-5、HaTRE2、HaTRE2-like的表达量均下调。与对照组相比,在dsHaPYK1-2组中48 h时可溶性海藻糖酶（TRE1）活性显著降低,海藻糖和糖原含量显著增加;在dsHaPYK1-1或dsHaPYK2组中48 h时葡萄糖含量减少,72 h时葡萄糖、海藻糖含量增加,膜结合型海藻糖酶（TRE2）活性显著提高;在dsHaPYK2组48 h时,海藻糖含量显著减少,而糖原含量显著增加。【结论】异色瓢虫体内存在3个HaPYK,通过导入外源dsHaPYK能成功干扰靶标基因的表达水平,且抑制表达后海藻糖代谢会受到影响,但3个HaPYK的调控机制不尽相同。
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| 关 键 词： | 异色瓢虫 生物信息学 丙酮酸激酶 海藻糖代谢 RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2021-06-02 |
Sequence Analysis of Harmonia axyridis Pyruvate Kinase Gene and Its Regulation of Trehalose Metabolism |
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| GE XinZhu,SHI YuXing,WANG ShaSha,LIU ZhiHui,CAI WenJie,ZHOU Min,WANG ShiGui,TANG Bin.Sequence Analysis of Harmonia axyridis Pyruvate Kinase Gene and Its Regulation of Trehalose Metabolism[J].Scientia Agricultura Sinica,2021,54(23):5021-5031. |
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| Authors: | GE XinZhu SHI YuXing WANG ShaSha LIU ZhiHui CAI WenJie ZHOU Min WANG ShiGui TANG Bin |
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| Institution: | College of Life and Environmental Sciences, Hangzhou Normal University, Hangzhou 311121 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Harmonia axyridis bioinformatics pyruvate kinase (PYK) trehalose metabolism RNA interference (RNAi) |
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