| 番木瓜果实酵母双杂交文库的构建及CpMYB114L互作蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 周陈平,杨 敏,郭金菊,等.番木瓜果实酵母双杂交文库的构建及CpMYB114L互作蛋白的筛选[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2022,50(7):127-137. |
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| 作者姓名： | 周陈平 杨 敏 郭金菊 等 |
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| 作者单位： | 广东省农业科学院 果树研究所，农业农村部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室，广东省热带亚热带果树研究重点实验室;广东省农业科学院 设施农业研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（32102355）；广东省现代农业产业技术体系创新团队建设项目（优稀水果）（2021KJ116）；广州市科技计划项目（202102020038）；广东省基础与应用基础研究基金项目（2020A1515011166）；广东省农业科学院院长基金项目（202011） |
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| 摘 要： | 【目的】从番木瓜4个不同成熟期果实的转录组中筛选并克隆得到1个转录因子CpMYB114L，构建番木瓜果实的cDNA文库，筛选与CpMYB114L互作的蛋白，探究CpMYB114L参与调控果实成熟的分子机理。【方法】以番木瓜‘GZBG’品种的果实为材料，设计特异引物，克隆CpMYB114L CDS区，利用生物信息学软件分析该基因序列及其编码的蛋白序列。提取番木瓜不同成熟期果实的总RNA，利用all-direct法建立酵母双杂交cDNA文库。构建pGBKT7-CpMYB114L诱饵载体，对其自激活检测后，通过共转化从文库中筛选CpMYB114L互作蛋白。通过在NCBI网站上进行序列比对，明确互作蛋白的功能分类，最后对各类蛋白基因在番木瓜不同成熟期果实中的表达进行分析。【结果】CpMYB114L基因的CDS序列编码227个氨基酸，预测其相对分子质量为26 304.3，理论等电点为6.23，亲水性总平均值为－0.893。CpMYB114L蛋白序列与甜樱桃（PaWERL）、蒺藜苜蓿（MtMYB1）、黧豆（MpMYB113）、大豆（GmMYB1）和苹果（MdMYB308L）的同源性较近。cDNA文库总库容为1.15×107 CFU，重组率100%，插入片段长度为750~2 000 bp。诱饵载体pGBKT7-CpMYB114L不存在自激活。从酵母双杂交文库中筛选到30个初始阳性克隆，经回转验证后最终获得26个与CpMYB114L互作的蛋白，共分为4类，包括乙烯响应受体1（CpERS1）、酰基辅酶A硫酯酶13（CpAcots13）、热休克蛋白42（CpHSP42）和叶绿体转运子159（CpTOC159）。在果实成熟过程中，CpERS1和CpHSP42表达量先上升后下降，CpAcots13表达量持续上升，CpTOC159表达量剧增后趋于平稳。【结论】推测CpMYB114L与CpERS1蛋白互作参与番木瓜果实成熟的调控。
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| 关 键 词： | 番木瓜 酵母双杂交 果实成熟 CpMYB114L 互作蛋白筛选 |
| 收稿时间： | 2021/8/20 0:00:00 |
Construction of yeast two-hybrid library and screening of CpMYB114L interacting protein in papaya fruit |
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| ZHOU Chenping,YANG Min,GUO Jinju,et al.Construction of yeast two-hybrid library and screening of CpMYB114L interacting protein in papaya fruit[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2022,50(7):127-137. |
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| Authors: | ZHOU Chenping YANG Min GUO Jinju |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | papaya yeast two-hybrid fruit ripening CpMYB114L interaction protein screening |
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