| Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及高效表达 |
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| 引用本文： | 王文东,刘军,孙洋,祝令伟,郭学军,周博,冯书章.Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及高效表达[J].中国兽医学报,2010,30(5). |
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| 作者姓名： | 王文东 刘军 孙洋 祝令伟 郭学军 周博 冯书章 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130062
2. 军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春,130062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30270985) |
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| 摘 要： | 通过PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中扩增出Stx1A基因序列,并将之与编码LHRH的基因序列连接起来,构建编码Stx1A-LHRH的重组融合基因片段,并定向克隆到表达质粒pET28a的NcoⅠ和EcoRⅠ位点之间,构建重组表达质粒pET28a::stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对重组菌株用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明重组菌株表达出了23700的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%。为了将来更好的进行目的蛋白的功能研究,本研究再将融合基因片段克隆到表达质粒pMAL-p2x中实现了重组蛋白的可溶性表达,表达的重组蛋白经amylose亲和层析柱一步纯化后纯度可达93.4%,为下一步进行重组蛋白的活性分析及其生物学作用研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 志贺毒素 LHRH 融合毒素 高效表达 |
Construction and expression of Stx1A-LHRH fusion toxin |
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| WANG Wen-dong,LIU Jun,SUN Yang,ZHU Ling-wei,GUO Xue-jun,ZHOU Bo,FENG Shu-zhang.Construction and expression of Stx1A-LHRH fusion toxin[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(5). |
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| Authors: | WANG Wen-dong LIU Jun SUN Yang ZHU Ling-wei GUO Xue-jun ZHOU Bo FENG Shu-zhang |
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| Institution: | WANG Wen-dong1,2,LIU Jun2,SUN Yang2,ZHU Ling-wei2,GUO Xue-jun2,ZHOU Bo2,FENG Shu-zhang1,2 (1.College of Animal Science , Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China,2.Institute of Veterinary Science,The Academy of Military Medical Science,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | shiga toxin LHRH fusion toxin expression |
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