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| 牛A组轮状病毒VP4全基因的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 南晓伟,杨少华,高运东,王长法,杨宏军,刘晓,仲跻峰,申之义,何洪彬.牛A组轮状病毒VP4全基因的克隆与原核表达[J].贵州农业科学,2009,37(7). |
| 作者姓名： | 南晓伟 杨少华 高运东 王长法 杨宏军 刘晓 仲跻峰 申之义 何洪彬 |
| 作者单位： | 1. 内蒙古农业大学,内蒙古,呼和浩特,010018;山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100 2. 山东省农业科学院奶牛研究中心,山东,济南,250100 3. 内蒙古农业大学,内蒙古,呼和浩特,010018 |
| 基金项目： | 山东省农业科学院青年基金项目"轮状病毒、VP7、大肠杆菌LTB基因融合表达及免疫原性研究"，山东省农业科学院院产业开发项目"犊牛轮状病毒疫苗中试与开发" |
| 摘 要： | 以G6型牛轮状病毒总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增牛轮状病毒VP4开放性阅读框,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pEASy-T3载体中,成功构建出克隆质粒pEASY-T3-VP4.经双酶切后再将该基因重组于原核表达载体pET32a(+)中,构建出原核表达质粒pET32a-VP4.将pET32a-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约108 KD的融合蛋白带,成功构建了能够稳定表达VP4蛋白的基因工程菌株,为进一步研制牛轮状病毒基因工程疫苗奠定了基础. |
| 关 键 词： | 牛轮状病毒 VP4蛋白 基因克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Full VP4 Gene of Group A Bovine Rotavirus |
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| NAN Xiao-wei,YANG Shao-hua,GAO Yun-dong,WAGN Chang-fa,YANG Hong-jun,LIU Xiao,ZHONG Ji-feng,SHEN Zhi-yi,HE Hong-bin.Cloning and Prokaryotic Expression of Full VP4 Gene of Group A Bovine Rotavirus[J].Guizhou Agricultural Sciences,2009,37(7). | |
| Authors: | NAN Xiao-wei YANG Shao-hua GAO Yun-dong WAGN Chang-fa YANG Hong-jun LIU Xiao ZHONG Ji-feng SHEN Zhi-yi HE Hong-bin |
| Institution: | 1.Inner Mongolia Agricultural University;Hohhot;Inner Mongolia 010018;2.Dairy Cattle Research Centre;Shandong Academy of Agricultural Sciences;Jinan;Shandong 250100;China |
| Abstract: | In order to construct the prokaryotic expression vector pET32a-VP4,total RNA were extracted form MA104 cell infected by bovine rotavirus G6 strain CHLY.The open reading frame of VP4(2331bp) was amplified by RT-PCR and cloned into pEASY-T3 vector by using T-A cloning technique to get cloning vector pEASY-T3-VP4.After,the VP4 gene was subcloned into the expression vector pET32a and transformed into E.coli BL21(DE3).SDS-PAGE showed that the bacteria induced by IPTG successfully expressed,and approximately 108K... |
| Keywords: | bovine rotavirus VP4 albumen gene cloning prokaryotic expression |
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