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| 牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立 | |
| 引用本文： | 郎景民,布日额,孙立杰,刘娣,吴金花,锡林高娃,刘燕,史芬芳.牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国预防兽医学报,2011,33(1). |
| 作者姓名： | 郎景民 布日额 孙立杰 刘娣 吴金花 锡林高娃 刘燕 史芬芳 |
| 作者单位： | 1. 内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古通辽,028043;内蒙古民族大学,动物科技学院,内蒙古,通辽,028043 2. 内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古通辽,028043;黑龙江省农业科学院,黑龙江,哈尔滨,150086 3. 内蒙古民族大学,生命科学学院,内蒙古通辽,028043 4. 黑龙江省农业科学院,黑龙江,哈尔滨,150086 5. 河北征宇制药有限公司,河北,石家庄,051431 |
| 基金项目： | 内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目，黑龙江省农业科学院博士后基金项目，第45批中国博士后科学研究基金，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定.根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主茵BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性.以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1:160,酶标二抗最适稀释度为1:4000.应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度. |
| 关 键 词： | 无乳链球菌 sip基因 原核表达 间接ELISA |
Prokaryotic expression of sip gene of bovine Streptococcus agalactiae and establishment of indirect ELISA |
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| LANG Jing-min,BU Ri-e,SUN Li-jie,LIU Di,wU Jin-hua,XILIN Gao-wa,LIU Yan,SHI Fen-fang.Prokaryotic expression of sip gene of bovine Streptococcus agalactiae and establishment of indirect ELISA[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2011,33(1). | |
| Authors: | LANG Jing-min BU Ri-e SUN Li-jie LIU Di wU Jin-hua XILIN Gao-wa LIU Yan SHI Fen-fang |
| Institution: | LANG Jing-min1,3,BU Ri-e1,2*,SUN Li-jie1,LIU Di2*,WU Jin-hua1,XILIN Gao-wa1,LIU Yan1,SHI Fen-fang4(1.College of Life Science,Inner Mongolia University for Nationalities,Tongliao 028043,China,2.Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150086,3.College of Animal Science and Technology,4.Hebei Junyu Pharmaceutical Corporation Limited,Shijiazhuang 051431,China) |
| Abstract: | To express the sip gene of bovine Streptococcus agalactiae and establish indirect ELISA assay for antibody detection,the antigenic epitope sequence of sip gene was amplified by PCR from clinical isolated strains using a pair of primers derived from the published sequence.The sip gene sequence was cloned into prokaryotic expression vector pET-30a(+) for expression in bacteria BL21 and its immunogenicity was confirmed by western blot analysis.An indirect ELISA assay was established using purified expression p... |
| Keywords: | Streptococcus agalactiae sip gene prokaryotic expression indirect ELISA |
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