| 非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 刘晓红,刘宏扬,叶光强,焦爽,宿志民,黄丽,翁长江.非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用[J].中国预防兽医学报,2023(9):922-929. |
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| 作者姓名： | 刘晓红 刘宏扬 叶光强 焦爽 宿志民 黄丽 翁长江 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物国家重点实验室;2. 山东畜牧兽医职业学院;3. 黑龙江省兽医免疫学重点实验室 |
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| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金(YQ2020C022)； |
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| 摘 要： | 非洲猪瘟病毒(ASFV) B318L是ASFV编码的晚期蛋白，具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用，本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L，经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 (DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中，采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白，利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达，采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性，采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示，在约60 ku处出现特异性条带，且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达；纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带，经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血，采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb)，经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果，采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示，制备的...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 B318L蛋白 多克隆抗体 |
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