| 森林脑炎病毒E基因DomainⅢ段的克隆表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 朱晓磊,林方,康晓平,李裕昌,杨银辉,钱爱东.森林脑炎病毒E基因DomainⅢ段的克隆表达及鉴定[J].吉林农业大学学报,2012(6):667-671. |
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| 作者姓名： | 朱晓磊 林方 康晓平 李裕昌 杨银辉 钱爱东 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学动物科学技术学院;军事医学科学院微生物流行病研究所 |
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| 基金项目： | 国家重大专项项目(2011zx10004-001) |
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| 摘 要： | 从森林脑炎病毒森张株的细胞培养液中提取总RNA,通过RT-PCR扩增E蛋白基因DomainⅢ段,克隆入原核表达载体GSTpET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行Western blot鉴定,并用针对不同病毒的兔免疫血清验证其检测特异性。重组原核表达质粒GSTpET-30a-ED3经酶切证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约为41 kD,主要以包涵体的形式表达,并可与TBE阳性兔免疫血清特异性反应。结果表明:成功克隆了森林脑炎病毒森张株E蛋白基因DomainⅢ段,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,获得的ED3蛋白质具有良好的特异性。
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| 关 键 词： | 森林脑炎病毒 E基因 克隆表达 |
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