| 布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 王晶钰,张三东,刘红彦,李河林,程媛媛,李宇立,战美娜.布鲁菌病多重PCR快速检测方法的建立及应用[J].动物医学进展,2010,31(Z1). |
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| 作者姓名： | 王晶钰 张三东 刘红彦 李河林 程媛媛 李宇立 战美娜 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨陵,712100 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划，陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中登录的布鲁菌(Brucella)omp31、bp26、omp10外膜蛋白基因序列,针对同一种病原,各设计合成了一对特异性引物,通过优化引物浓度组合,建立了检测布鲁菌472 bp、290 bp、162 bp片段的多重PCR快速检测方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法从布鲁菌标准菌株中扩增出了特异性的目的片段,而对大肠埃希菌等细菌的扩增结果均为阴性。经过对10倍倍比稀释的模板进行检测,多重PCR的敏感度为最低可检出1.1×10-3ng的DNA,在感染布鲁菌病奶牛乳汁模拟标本中最低可检出细菌数为80 cfu/mL。不同人员用该方法重复检测,结果均一致,表明重复性好。应用该方法对88份临床疑似布鲁菌感染的奶牛乳样进行了检测,结果检出17份阳性,阳性检出率约为19.3%。检测结果表明,该方法具有特异、敏感、重复性好等优点,可用于奶牛布鲁菌病的临床检测及流行病学监测等。
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| 关 键 词： | 布鲁菌 外膜蛋白基因 多重PCR 检测 |
Establishment and Application of Multiplex-PCR for Rapid Detection of Brucellosis |
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| WANG Jin-yu,ZHANG San-dong,LIU Hong-yan,LI He-lin,CHENG Yuan-yuan,LI Yu-li,ZHAN Mei-na.Establishment and Application of Multiplex-PCR for Rapid Detection of Brucellosis[J].Progress In Veterinary Medicine,2010,31(Z1). |
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| Authors: | WANG Jin-yu ZHANG San-dong LIU Hong-yan LI He-lin CHENG Yuan-yuan LI Yu-li ZHAN Mei-na |
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