| 杜梨PbNHX1基因的克隆、表达分析及功能验证 |
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| 引用本文： | 刘威,李慧,蔺经,杨青松,常有宏.杜梨PbNHX1基因的克隆、表达分析及功能验证[J].果树学报,2018(2). |
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| 作者姓名： | 刘威 李慧 蔺经 杨青松 常有宏 |
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| 作者单位： | 南京农业大学园艺学院;江苏省农业科学院果树研究所;江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室; |
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| 摘 要： | 【目的】克隆1个杜梨Na~+/H~+逆向转运蛋白基因PbNHX1,并对其序列特征、表达特点及功能进行研究。【方法】采用RT-PCR和PCR克隆PbNHX1的c DNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,定量PCR检测其在非生物胁迫下转录水平变化,酵母互补试验检测PbNHX1基因的离子转运能力。【结果】杜梨PbNHX1基因c DNA编码区长1 704 bp,对应基因组DNA序列长3 594 bp,由13个外显子和12个内含子组成,编码蛋白含567个氨基酸。系统进化树显示,PbNHX1位于液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白分支上,与杨树液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白Pt NHX1.3基因亲缘关系较近。正常生长条件下,PbNHX1在杜梨叶片中表达量高于根。施加200 mmol·L-1Na Cl、10%(φ)PEG6000或100μmol·L-1ABA后,PbNHX1在叶片中的转录水平持续上升;其在根中的表达量先升后降,表达高峰依次出现在处理后6、3和6 h。PbNHX1的转入可恢复Na Cl、KCl和潮霉素B对nhx1缺失酵母菌株AXT3的生长抑制,转基因酵母细胞中Na~+和K~+含量显著增加。【结论】PbNHX1具有植物NHXs基因家族的固有特征,对盐碱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,转入该基因能够提高酵母nhx1缺失突变体AXT3对盐胁迫的耐受能力,部分恢复其对阳离子的转运功能,从而促进Na~+、K~+积累。
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| 关 键 词： | 杜梨 PbNHX1基因 序列特征 表达特点 酵母互补 |
Cloning,expression and functional analysis of PbNHX1 gene in Pyrus betulaefolia |
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