| 牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究 |
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| 引用本文： | 孙仰峰,李文辉,李勐,高明春,王薇,魏双施,王君伟.牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究[J].中国预防兽医学报,2008,30(11). |
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| 作者姓名： | 孙仰峰 李文辉 李勐 高明春 王薇 魏双施 王君伟 |
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| 作者单位： | 东北农业大学,动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 黑龙江省重大科技攻关计划项目
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| 摘 要： | 基于对RNA二级结构的预测和密码子偏性计算，通过计算机辅助软件进行牛IFN-α基因优化，经人工合成优化后的基因与pWL表达载体连接后诱导表达，并对表达条件进行优化。SDS-PAGE分析表明，其产物分子量约为17ku，最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的33％，表达产物以包涵体形式存在。经过包涵体溶解、初步复性后利用CM Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统，采用梯度法进行牛α-干扰素包涵体蛋白质的纯化复性。结果表明，梯度离子交换层析法能有效地复性牛α-干扰素包涵体，复性后的重组牛α-干扰素的纯度达95％，通过离子交换层析柱纯化和复性后，重组牛α-干扰素在MDBK/VSV细胞系上的抗病毒活性为5．56×10^6 u／mg。
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| 关 键 词： | 牛 α-干扰素基因 抗病毒活性 纯化 |
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