| 牛Nramp1基因启动子的克隆及其活性分析 |
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| 引用本文： | 王洪梅,张利博,侯明海,王长法,王玲玲,孙涛,何洪彬,仲跻峰.牛Nramp1基因启动子的克隆及其活性分析[J].中国农业科学,2011,44(5):1022-1028. |
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| 作者姓名： | 王洪梅 张利博 侯明海 王长法 王玲玲 孙涛 何洪彬 仲跻峰 |
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| 作者单位： | (山东省农业科学院奶牛研究中心) |
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| 基金项目： | 国家“863”计划项目(2006AA10Z1D9,2007AA10Z169); 山东省自然基金(ZR2010CM012); 公益性行业科技专项(nyhyzx07-036-09); 泰山学者海外特聘专家(何洪彬); 转基因专项(2009ZX08007-006B) |
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| 摘 要： | 【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5′侧翼区长片段及固定3′端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定。【结果】牛Nramp1基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58—-89区域具有基本的启动子功能,+58—-1 748启动子活性最强。进一步研究表明,-89—-205 bp区域、 -278—-1 495 bp区域存在着正调控元件,在-205—-278 bp区域内存在着负调控元件;另外,LPS能显著增强启动子活性,其诱导牛Nramp1基因的表达具有细胞特异性和剂量依赖性。【结论】成功构建了含推测的牛Nramp1基因启动子片段的重组报告基因载体, 确定了启动子核心区域和主要的调控区域。
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| 关 键 词： | 牛Nramp1基因 启动子活性 调控区 LPS诱导 |
| 收稿时间： | 2010-04-26; |
Cloning and Activity Analysis of Bovine Natural Resistance Associated Macrophage Protein 1 (Nramp1)Gene Promoter |
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| WANG Hong-mei,ZHANG Li-bo,HOU Ming-hai,WANG Chang-fa,WANG Ling-ling,SUN Tao,HE Hong-bin,ZHONG Ji-feng.Cloning and Activity Analysis of Bovine Natural Resistance Associated Macrophage Protein 1 (Nramp1)Gene Promoter[J].Scientia Agricultura Sinica,2011,44(5):1022-1028. |
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| Authors: | WANG Hong-mei ZHANG Li-bo HOU Ming-hai WANG Chang-fa WANG Ling-ling SUN Tao HE Hong-bin ZHONG Ji-feng |
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| Institution: | WANG Hong-mei,ZHANG Li-bo,HOU Ming-hai,WANG Chang-fa,WANG Ling-ling,SUN Tao,HE Hong-bin,ZHONG Ji-feng(Dairy Cattle Research Center,Shandong Academy of Agricultural Science,Jinan 250100) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine Nramp1 gene promoter active regulatory region LPS inducing |
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