| 红光熊蜂GS、Akt2基因克隆与低温胁迫表达 |
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| 引用本文： | 王丹丹,王 星,周翘楚.红光熊蜂GS、Akt2基因克隆与低温胁迫表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2022,50(4):115-123. |
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| 作者姓名： | 王丹丹 王 星 周翘楚 |
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| 作者单位： | 辽东学院 农学院 |
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| 基金项目： | 中央财政专项（851800501）；辽宁省科学事业公益研究项目（2019N0021） |
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| 摘 要： | 【目的】探究红光熊蜂低温胁迫不同时间、不同温度下GS、Akt2基因的表达差异，为研究红光熊蜂抵御低温胁迫的分子机制提供参考。【方法】以RT-PCR结合RACE技术，克隆、测序红光熊蜂GS、Akt2基因，通过ORF Finder、Prot Param和TBtools等生物信息学软件预测红光熊蜂GS和Akt2蛋白的结构、理化特性以及染色体定位等信息；设计GS、Akt2基因特异性引物，采用实时荧光定量PCR技术检测不同温度、不同处理时间下GS、Akt2基因相对表达量的差异。【结果】红光熊蜂GS基因全长1 417 bp，开放阅读框（ORF）1 020 bp，编码339个氨基酸；GS蛋白二级结构包括无规则卷曲（51.92%）、α-螺旋（23.89%）、延伸链（12.09%）和β-转角（12.09%），具有12个Ser、6个Thr、2个Tyr，可能为GS蛋白激酶磷酸化位点。Akt2基因全长926 bp，ORF为837 bp，编码278个氨基酸；Akt2蛋白二级结构包括α-螺旋（34.89%）、无规则卷曲（33.45%）、延伸链（23.74%）和β-转角（7.91%），具有7个Ser、8个Thr、5个Tyr，可能成为Akt2蛋白激酶磷酸化位点。亚细胞定位GS、Akt2蛋白均存在于线粒体中，为亲水性蛋白，且无信号肽序列，故均为非分泌蛋白。GS、Akt2基因分别位于红光熊蜂1H和3H号染色体上。5~25 ℃时，红光熊蜂GS基因相对表达量随温度降低而显著下调，而Akt2基因相对表达量则随温度降低呈明显上升趋势，且15 ℃时其相对表达量显著升高，5 ℃达到峰值。8 ℃低温胁迫不同时间，随胁迫时间延长，GS基因相对表达量显著下降；而Akt2基因的相对表达量显著升高，且胁迫12 h达到峰值，随后其相对表达量随胁迫时间延长而缓慢恢复。【结论】红光熊蜂GS、Akt2基因可能通过调控PI3K/Akt或Mtor/FoxO通路以抵御低温胁迫。
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| 关 键 词： | 红光熊蜂 基因克隆 低温胁迫 基因表达 |
| 收稿时间： | 2021/4/9 0:00:00 |
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