| 新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 曾国航,徐宏伟,李莲瑞,等.新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2016,44(9):128-134. |
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| 作者姓名： | 曾国航 徐宏伟 李莲瑞 等 |
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| 作者单位： | 塔里木大学 生命科学学院,塔里木大学 生命科学学院,塔里木大学 动物科学学院；新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目“棉酚对新疆多浪羊白细胞介素表达的影响研究”(30960277)；创新群体项目“南疆地区羊标准化养殖的群发病防控及预警响应机制研究”（TDZKCX201401） |
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| 摘 要： | 【目的】构建新疆多浪羊IL-1β基因编码区的原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,为进一步研究IL-1β蛋白的结构功能奠定基础。【方法】从含质粒pMD-18T-IL-1β的大肠杆菌DH5α中获取IL-1β基因,与pET-28b质粒DNA连接,构建原核表达载体pET-28b-IL-1β。先将其转化到克隆载体E.coli DH5α感受态细胞中大量拷贝,经菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后,提取pET-28b-IL-1β质粒转化到表达载体E.coli BL21(DE3)中,再次进行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定。将阳性单克隆接种于LB液体培养基,以终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导,用SDS-PAGE电泳检测IL-1β蛋白的表达及存在形式,通过Western blotting验证表达产物是否为目的蛋白。【结果】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,该载体经诱导后表达出融合蛋白,分子质量为32.4ku,主要以包涵体的形式表达;经Western blotting检测,带有6×His标签的融合蛋白有很好的反应原性。【结论】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,其在大肠杆菌BL21(DE3)中经诱导后表达出分子质量约为32.4ku的IL-1β融合蛋白。
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| 关 键 词： | 多浪羊 IL-1β基因 原核表达 |
| 收稿时间： | 2015/1/28 0:00:00 |
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