| 猪囊尾蚴TsCL-1基因的原核表达 |
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| 引用本文： | 宋军科,才学鹏,窦永喜,骆学农,林青,于三科.猪囊尾蚴TsCL-1基因的原核表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010(10):15-18,26. |
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| 作者姓名： | 宋军科 才学鹏 窦永喜 骆学农 林青 于三科 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高科技研究发展计划“863”项目(2006AA10A207) |
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| 摘 要： | 【目的】探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1蛋白的生物学特性,为研究半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础。【方法】将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转入大肠杆菌BL21进行表达,诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽(GST)-琼脂糖亲和层析法进行纯化,纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测。【结果】经SDS-PAGE分析显示,猪囊尾蚴TsCL-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61ku,表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4%。表达产物应用GST琼脂糖凝胶纯化后,纯化蛋白的纯度可达90%以上。明胶蛋白电泳结果显示,纯化蛋白对明胶具有水解活性,并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64抑制。【结论】从重组菌中成功表达了目的蛋白,该蛋白具有明显的水解活性,且E-64对其水解活性有抑制作用。
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| 关 键 词： | 猪囊尾蚴 半胱氨酸蛋白酶 TsCL-1基因 原核表达 纯化 水解活性 |
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