| 棉铃虫组织蛋白酶B酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 |
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| 引用本文： | 杜欣军,邵红莲,邵丁丁,赵小凡,王金星.棉铃虫组织蛋白酶B酶原在大肠杆菌中的表达及纯化[J].农业生物技术学报,2004,12(2):162-166. |
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| 作者姓名： | 杜欣军 邵红莲 邵丁丁 赵小凡 王金星 |
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| 作者单位： | 山东大学生命科学院生化与分子生物学研究所,济南,250100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.39870095,2008002,30330070)和国家高技术研究发展计划(863)项目(No.2001AA214031-1-2)资助. |
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| 摘 要： | 用合成的基因特异性引物通过RT-PCR扩增，获得棉铃虫(Helicoverpa armigera)组织蛋白酶B基因(HCB)，将基因克隆到pGEX-4T-1载体，在大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α内进行扩增，经过PCR筛选获得阳性克隆并提取质粒和测序验证后，再转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。表达产物为组织蛋白酶B-谷胱甘肽S转移酶的融合蛋白，分子量在63kD左右。表达产物形成了包涵体，经过对包涵体变性和复性处理，得到了可溶性的融合蛋白，可被Glutathione Sepharose 4B柱亲和纯化，用凝血酶裂解融合蛋白后，经SDS-PAGE分离到37kD左右的棉铃虫组织蛋白酶B酶原。N-末端氨基酸测序鉴定表达产物为棉铃虫组织蛋白酶B。
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| 关 键 词： | 棉铃虫 组织蛋白酶B 酶原 大肠杆菌 表达 纯化 包涵体 SDS-PAGE |
| 修稿时间： | 2003年5月12日 |
Expression and Purification of Procathepsin B from Helicoverpa armigera in Escherichia coli |
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