| 转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用 |
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| 引用本文： | 任小芳,刘振邦,朱虹,黄勃,李增智.转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用[J].安徽农业大学学报,2011,38(5):736-741. |
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| 作者姓名： | 任小芳 刘振邦 朱虹 黄勃 李增智 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥,230036;安徽农业大学微生物防治省重点实验室,合肥,230036 |
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| 基金项目： | 国家”863”计划(2006AA10A212);国家自然科学基金(30972368)共同资助 |
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| 摘 要： | 根据苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa序列设计全基因扩增引物,并在引物两端添加合适的酶切位点进行PCR扩增,纯化的PCR产物和载体pbarGPE1分别经Xho I和EcoR I双酶切、连接,构建真菌表达载体pbarGPE1-vip3Aa。将构建好的质粒经Sca I酶切线性化后,利用芽生孢子转化法转入昆虫病原真菌球孢白僵菌Bb13菌株内,得到白僵菌工程菌株Bb13V。RT-PCR结果证明Vip3Aa在工程菌株中已得到成功转录。在室内恒温25℃条件下,用喂食、喷雾以及两者相结合的方法,分别测定1×105、1×106、1×107、1×108和2×108孢子.mL-1 5个不同孢子浓度下原始菌株和工程菌株对二龄马尾松毛虫的毒力。结果表明,在前4种不同浓度的处理条件下,采取3种不同的处理方式,工程菌株均比喷雾处理的原始菌株致死率提高30%以上;喷雾处理的毒力提高33.6~62.1倍;喂食处理的致死率均高于喷雾处理。在1×108孢子.mL-1浓度下,喂食处理的致死率显著高于喷雾处理,致死中时缩短6.89 d。因此,Vip3Aa基因在转入白僵菌后得到了表达,从而赋予白僵菌可观的胃毒作用,使得工程菌对松毛虫的毒力明显增强。
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| 关 键 词： | 球孢白僵菌 苏云金杆菌 Vip3Aa基因 载体构建 芽生孢子转化 基因工程 |
| 收稿时间： | 2011/4/20 0:00:00 |
Generation of transgenic Beauveria bassiana strain with Vip3Aa gene and its enhanced virulence on Dendrolimus punctatus |
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| REN Xiao-fang,LIU Zhen-bang,ZHU Hong,HUANG Bo and LI Zeng-zhi.Generation of transgenic Beauveria bassiana strain with Vip3Aa gene and its enhanced virulence on Dendrolimus punctatus[J].Journal of Anhui Agricultural University,2011,38(5):736-741. |
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| Authors: | REN Xiao-fang LIU Zhen-bang ZHU Hong HUANG Bo and LI Zeng-zhi |
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| Institution: | (Provincial Key Laboratory of Microbial Control,Anhui Agricultural University,Hefei 230036) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Beauveria bassiana Bacillus thuringiensis Vip3Aa gene vector construction blastospore transformation gene engineering |
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