| 猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建 |
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| 引用本文： | 师东方,李一经,范锡龙,贾永清,王君伟,刘宝全,陈淑红.猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建[J].中国预防兽医学报,2002,24(6):408-412. |
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| 作者姓名： | 师东方 李一经 范锡龙 贾永清 王君伟 刘宝全 陈淑红 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学,动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030
2. 黑龙江省兽药饲料监察所,哈尔滨,150009 |
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| 基金项目： | 黑龙江省“九五”科技攻关计划项目，项目编号 :G99B8_1_1 |
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| 摘 要： | 用MA104细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物，通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18-T载体中，构建了重组质粒pMD18-T-JL94/VP7,并对其进行了HindⅢ，HindⅢ和BamH I的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定，证明pMD18-T-JL94/VP7的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物，通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18-T载体中构建了重组质粒pMD18-T-VP7,酶切鉴定其大小和方向后，与真核表达载体pcDNA3.1( )分别用HindⅢ和BamH I双酶切，胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定，成功地构建了真核表达质粒pcDNA-VP7。
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| 关 键 词： | 猪轮状病毒 国内分离株 基因克隆 真核表达质粒 VP7基因 RT－PCR |
| 文章编号： | 1008-0589(2002)06-0408-05 |
| 修稿时间： | 2002年4月18日 |
Cloning of Gene Encoding OuterCapsid Protein VP7 from Porcine Rotavirus(RV) JL94 Strain and Construction of its Eukaryotic Expression Plasmid |
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| SHI Dong_fang,LI Yi_jing,FAN Xi_long,JIA Yiong_qing,WANG Jun_wei,LIU Bao_quan,CHEN Shu_hong.Cloning of Gene Encoding OuterCapsid Protein VP7 from Porcine Rotavirus(RV) JL94 Strain and Construction of its Eukaryotic Expression Plasmid[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2002,24(6):408-412. |
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| Authors: | SHI Dong_fang LI Yi_jing FAN Xi_long JIA Yiong_qing WANG Jun_wei LIU Bao_quan CHEN Shu_hong |
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| Keywords: | Porcine rotavirus VP7 Cloning Expression plasmid Construction |
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