| 天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 盛 媛,王浩然,胡宁宁,等.天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定[J].中国兽医学报,2014(3):384-389. |
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| 作者姓名： | 盛 媛 王浩然 胡宁宁 等 |
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| 作者单位： | ;1.吉林农业大学动物科学技术学院;2.军事医学科学院军事兽医研究所;3.吉林大学农学部 |
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| 摘 要： | 本研究旨在通过敲除部分与天坛株痘苗病毒(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)毒力和宿主范围等相关的复制非必需基因,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术,构建多基因缺失VTT弱毒株。人工合成7对重组臂,结合痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP),构建穿梭载体质粒pTC-EGFP、pTA35-EGFP、pTA66-EGFP、pTE-EGFP、pTB-EGFP、pTI-EGFP和pTJ-EGFP。将上述质粒依次与VTT或基因缺失VTT共转/感染BHK细胞,并通过同源重组和荧光蚀斑筛选方法,逐一敲除拟缺失基因片段(TC:TC7LTK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13RTK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13RTB14R;TI:TI4L;TJ:TJ2R)。利用Cre/Loxp系统实现对外源筛选标记的敲除,最终获得天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株TTVAC7,并运用PCR方法对TTVAC7进行鉴定和遗传稳定性检测。结果表明,本研究成功构建了缺失7个目的片段的天坛株痘苗病毒弱毒株TTVAC7,且该弱毒株具有良好的遗传稳定性。
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| 关 键 词： | 天坛株痘苗病毒 基因缺失 同源重组 增强型绿色荧光蛋白 |
Construction and identification of the attenuated vaccinia Tiantan strain deleted for multiple genes |
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