| 番茄不同截短U3启动子的克隆及功能分析 |
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| 引用本文： | 蒲艳,刘晓东,阿尔祖古丽·塔什,魏倩,刘超.番茄不同截短U3启动子的克隆及功能分析[J].华北农学报,2019,34(1). |
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| 作者姓名： | 蒲艳 刘晓东 阿尔祖古丽·塔什 魏倩 刘超 |
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| 作者单位： | 新疆农业大学 农学院,新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052;新疆农业大学 农学院,新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052;新疆农业大学 农学院,新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052;新疆农业大学 农学院,新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052;新疆农业大学 农学院,新疆农业大学农业生物技术重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052 |
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| 摘 要： | 从中蔬四号番茄品种中克隆能在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子,为今后利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行分子育种奠定了基础。采用2轮PCR的方法,第1轮PCR从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3启动子,再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短,共得到6个不同长度的启动子,并分别构建6个截短的SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体,利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片。运用DNAMAN软件对已克隆的SlU3和拟南芥AtU3启动子序列具有转录功能的必要元件进行序列分析;经过2轮PCR,首先从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3-1P、SlU3-3P、SlU3-4P启动子,其长度分别是1 156,1 114,1 147 bp,再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短,共得到6个不同长度的启动子,其长度依次是489,318,450,248,457,248 bp,并分别构建6个截短SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体,启动子序列比对分析发现,番茄U3启动子与拟南芥U3启动子一样,也含有比较保守的2个元件,USE和TATA框,2个元件之间的位置比较固定。利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片,结果显示,成功侵染后的番茄叶片均被染成蓝色,表明已克隆的6种不同截短番茄SlU3启动子均具有转录活性。成功克隆了6种在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子,为构建番茄CRISPR/Cas9基因编辑载体提供更多高效的内源启动子。
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| 关 键 词： | 番茄 SlU3启动子 克隆 农杆菌转化 番茄叶片 |
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