| 鸡细小病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 张艳芳,谢芝勋,谢志勤,张民秀,曾婷婷,邓显文,谢丽基,罗思思,黄娇玲,李孟.鸡细小病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用[J].动物医学进展,2023(4):25-30. |
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| 作者姓名： | 张艳芳 谢芝勋 谢志勤 张民秀 曾婷婷 邓显文 谢丽基 罗思思 黄娇玲 李孟 |
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| 作者单位： | 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室 |
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| 基金项目： | 广西科技重大专项(桂科AA17204057)； |
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| 摘 要： | 旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus, ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列，筛选了特异性探针引物组，采用不同探针引物浓度组合和退火温度梯度对反应条件进行优化，并通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较，同时对其他常见禽病病原体进行检测，以及对40份临床样品进行检测，评估了该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示，该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L,最佳探针浓度为600 nmol/L;最佳退火温度为54.0℃;灵敏度比qPCR和普通PCR分别高10倍和1000倍，最低检测限为4.5 copies/μL;对其他常见禽病病原体进行ChPV微滴式数字PCR检测，结果均为阴性；批内和批间重复性较好，变异系数小。结果表明，所建立的ddPCR方法具有更高的敏感性和准确性，可成功用于快速定量检测ChPV感染。
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| 关 键 词： | 鸡细小病毒 微滴式数字PCR 敏感性 特异性 |
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