| 线粒体DNA缺失质粒pMDD-Z的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 张朝明,赵文霞,汤树生,靳溪,张婷,刘凤英,肖希龙.线粒体DNA缺失质粒pMDD-Z的构建及鉴定[J].中国兽医杂志,2014(1):8. |
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| 作者姓名： | 张朝明 赵文霞 汤树生 靳溪 张婷 刘凤英 肖希龙 |
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| 作者单位： | ;1.中国农业大学动物医学院国家兽药安全评价中心;2.北京师范大学生命科学学院;3.中国科学院北京基因组研究所 |
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| 摘 要： | 分别以pEGFP-Mito和pAN4质粒为模板,扩增出MTS-EGFP和EcoRⅠ基因片段,利用快速体外基因重组技术-重组PCR,将两者连接得到MTS-EGFP-EcoRⅠ片段,构建克隆载体pTRE2hyg-EE,经AgeⅠ和NotⅠ双酶切得到MTS-EGFP-EcoRⅠ融合基因产物,连接克隆于真核表达质粒pEGFP-Mito后获得pMDD-Z质粒。琼脂糖凝胶电泳结果显示,MTSEGFP和EcoRⅠ基因片段大小分别是831 bp和860 bp。测序结果显示,插入pTRE2hyg--EE克隆载体中的MTS-EGFPEcoRⅠ片段大小1 672 bp,且基因序列正确,没发生点突变。琼脂糖凝胶电泳结果显示,pMDD-Z质粒的双酶切产物分别为1 587 bp的插入片段和4 024 bp的载体片段。测序结果显示,pMDD-Z质粒中含1 659 bp的开放阅读框,编码553个氨基酸,从N端至C端,分别为线粒体信号导肽、绿色荧光蛋白和限制性内切酶EcoRⅠ,且未发生移码突变。
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| 关 键 词： | 线粒体DNA Rho~0细胞 克隆 重组PCR 质粒构建 |
Construction and identification of mitochondrial DNA deficient plasmid pMDD-Z |
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