| 大鳞副泥鳅GPR30基因的克隆及EE2暴露对其表达的影响 |
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| 引用本文： | 章 霞,张莹莹,李 蒙.大鳞副泥鳅GPR30基因的克隆及EE2暴露对其表达的影响[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2013,41(12):21-29. |
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| 作者姓名： | 章 霞 张莹莹 李 蒙 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 陕西省自然科学基金项目(2011JM3009)；中央高校基本科研业务费专项(QN2011062) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor30)基因GPR30,研究其在成鱼各组织中的表达状况;用EE2(17α-ethynylestradiol)处理大鳞副泥鳅雌性幼鱼后,检测GPR30、ERαmRNA在幼鱼肝脏和卵巢中的表达状况,探究EE2对雌激素膜受体GPR30和经典雌激素核受体ERα基因表达的影响,推测GPR30可能存在的生理功能。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术,克隆大鳞副泥鳅GPR30,对其核苷酸序列及所编码的氨基酸序列信息和进化关系进行分析;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,研究GPR30mRNA在大鳞副泥鳅成鱼性腺、肠道、肌肉、肾脏、脑、肝脏、鳃、眼睛等组织中的表达状况,以及经不同质量浓度(1,5,25ng/L)EE2处理后雌性幼鱼肝脏和卵巢中GPR30和ERαmRNA的表达。【结果】克隆获得了GPR30,该基因全长2 152bp,阅读框全长1 062bp,编码353个氨基酸,该基因氨基酸序列与斑马鱼的GPR30氨基酸序列相似性最高,达92.9%。GPR30氨基酸序列的比对结果显示,大鳞副泥鳅与其他脊椎动物的GPR30结构域一致。荧光定量PCR分析表明,GPR30在大鳞副泥鳅成鱼卵巢中表达最高,在雄鱼肠道中表达最低,且GPR30mRNA在雌雄大鳞副泥鳅的性腺中差异性表达,在卵巢中的表达量较精巢中高702倍。EE2暴露试验显示,在5ng/L EE2处理组的卵巢及1和5ng/L EE2处理组的肝脏中,GPR30有略微增长;随着EE2质量浓度的增高,ERαmRNA在肝脏中的相对表达水平较对照组显著增长。【结论】成功克隆了大鳞副泥鳅GPR30,其与哺乳动物的GPR30有相似的结构和功能,可能与雌激素效应存在密切关系。在基因转录水平上,GPR30与ERα可能不存在直接的显著相关关系。
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| 关 键 词： | 大鳞副泥鳅 GPR30 基因克隆 实时荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 1/4/2013 12:00:00 AM |
Cloning of GPR30 gene and the effects of EE2 on its mRNA expression in Paramisgurnus dabryanus |
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| ZHANG Xia;ZHANG Ying-ying;LI Meng;ZHENG Yao;WANG Zai-zhao.Cloning of GPR30 gene and the effects of EE2 on its mRNA expression in Paramisgurnus dabryanus[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2013,41(12):21-29. |
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| Authors: | ZHANG Xia;ZHANG Ying-ying;LI Meng;ZHENG Yao;WANG Zai-zhao |
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| Institution: | ZHANG Xia;ZHANG Ying-ying;LI Meng;ZHENG Yao;WANG Zai-zhao;College of Animal Science and Technology,Northwest A&F University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Paramisgurnus dabryanus GPR30 gene cloning quantitative real time PCR |
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