| 卷羽鸡毛囊发育规律及卷羽候选基因KRT75遗传特征分析 |
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| 引用本文： | 陶林,杜炳旺,张丽.卷羽鸡毛囊发育规律及卷羽候选基因KRT75遗传特征分析[J].中国农业科学,2015,48(4):821-830. |
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| 作者姓名： | 陶林 杜炳旺 张丽 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学农学院动物科学系/广东海洋大学家禽育种中心，广东湛江 524008 |
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| 基金项目： | 科技部农转资金项目(2012GB2E000341);广东省科技攻关项目(2012B020305008);广东省省创新校项目(DOU201305022);国家特种经济动物种质资源共享平台子课题(201402-09);湛江市2012年科技攻关项目(湛财工【2012】196号);广东海洋大学校选课题(1212339;0712130) |
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| 摘 要： | 【目的】研究卷羽鸡卷羽弯曲过程、结构特点、卷羽毛囊发育规律和卷羽候选基因KRT75序列特征及其在卷羽毛囊发育过程中的表达规律。【方法】通过对360只卷羽鸡从1日龄到300日龄卷羽发生情况进行观察，了解其羽毛出壳后弯卷过程；制作成年卷羽和片羽羽毛切片，了解卷羽羽轴、羽枝、羽小枝、羽小钩显微结构特点；对卷羽鸡和片羽鸡胚胎期8-19 d皮肤毛囊制作石蜡切片，阐明卷羽毛囊发生过程，分析卷羽和片羽毛囊发育异同；分别提取13胚龄卷羽和片羽鸡皮肤RNA，反转录为cDNA，连接pMD? 18-T 载体，将连接产物加入DH5α感受态细胞中，转化涂板，挑取白色菌落摇菌后PCR鉴定，阳性菌液送测序，同时随机抽取15只300日龄片羽鸡和15只卷羽鸡，翅下静脉采血,血液基因组柱式小量提取试剂盒提取DNA,PCR产物纯化后测序，采用DNAMAN软件比对分析KRT75基因的遗传特征；分别提取卷羽和片羽胚胎期E 8-E 17d皮肤RNA，反转录成cDNA，根据SYBR试剂盒操作说明荧光定量KRT75基因在卷羽和片羽整个毛囊发育过程中的表达变化规律。【结果】卷羽鸡初生绒羽弯曲明显，以后逐渐弯曲，在第一次换羽结束时（约6周龄左右）全身羽毛显著弯曲；卷羽羽轴向外翻卷，羽小枝上着生羽钩，但羽小枝之间不能相互勾连形成闭合羽片；卷羽毛囊发育从胚胎期第8天开始到第16天结束，整个过程类似于片羽毛囊发育，卷羽毛囊在胚胎期第8-16天完成，整个过程和片羽毛囊发育过程基本相似，但在12-15胚龄卷羽毛囊髓质面积、羽小枝大小与片羽毛囊存在明显差异，其中在第12-14天，卷羽毛囊髓质面积要明显大于片羽，羽小枝板要明显小于片羽；卷羽鸡和片羽鸡KRT75基因CDS全长均为1 569bp，编码522个氨基酸，全序列没有发生69 bp的缺失突变，但在CDS区的3个SNP（954bp: T>C；967bp: T>C；978bp: C>T）可能是卷羽、片羽区别的分子标记；KRT75基因在片羽和卷羽中的表达变化存在明显差异，在片羽毛囊胚胎期E8-E17中表达量均很低，而在卷羽鸡12胚龄显著上调，且高表达量持续到15胚龄，16胚龄显著下调，其中在胚胎期第9、10、12-16天KRT75基因在卷羽中的表达量均极显著高于片羽（P<0.01），KRT75基因可能在卷羽羽轴髓质和羽小枝分化过程中起重要作用。【结论】初步研究表明卷羽鸡的卷羽并不是由于KRT75基因缺失突变引起，但KRT75可能与卷羽髓质和羽枝嵴形成有关。
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| 关 键 词： | 卷羽鸡 毛囊发育 KRT75 SNP 表达 |
| 收稿时间： | 2014-03-26 |
The Development of Frizzled Follicle and Genetic Characteristics of Candidate Gene KRT75 in Frizzled Feather Chicken |
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| TAO Lin;DU Bing-wang;ZHANG Li.The Development of Frizzled Follicle and Genetic Characteristics of Candidate Gene KRT75 in Frizzled Feather Chicken[J].Scientia Agricultura Sinica,2015,48(4):821-830. |
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| Authors: | TAO Lin;DU Bing-wang;ZHANG Li |
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| Institution: | Department of Animal Science, Agricultural College of Guangdong Ocean University/Poultry Breeding Center of Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, Guangdong |
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