| 重组鹅IFN-α在大肠杆菌中的表达及抗血清制备 |
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| 引用本文： | 周游,杨文涛,黄科谚,晋玉北,冯博,石春卫,黄海滨,王建忠,姜延龙,康元环,杨桂连,王春凤.重组鹅IFN-α在大肠杆菌中的表达及抗血清制备[J].黑龙江畜牧兽医,2019(19). |
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| 作者姓名： | 周游 杨文涛 黄科谚 晋玉北 冯博 石春卫 黄海滨 王建忠 姜延龙 康元环 杨桂连 王春凤 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学动物科学技术学院/吉林省动物微生态制剂工程研究中心/动物生产及产品质量安全省部共建教育部重点实验室 |
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| 摘 要： | 为了研究鹅α干扰素(goIFN-α)基因原核表达产物的反应原性并进行goIFN-α抗血清的制备,试验首先根据大肠杆菌偏爱密码子对goIFN-α基因进行优化,随后采用PCR方法扩增goIFN-α编码序列并进行同源性分析。将goIFN-α片段与表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒pET-28a-goIFN-α,然后将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot检测。通过切胶回收的方法回收目的条带,将碾碎的蛋白胶与PBS混合后注入小鼠体内,15 d后回收血清进行Western-blot检测。结果表明:试验成功扩增出goIFN-α基因;与多种IFN-α基因序列进行比较,goIFN-α基因氨基酸序列的同源性为92.5%～98.1%;随后成功构建出重组表达质粒pET-28a-goIFN-α,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,重组蛋白goIFN-α的分子质量约为18 ku,具有良好的反应原性;回收血清进行Western-blot检测,鼠抗goIFN-α血清制备成功。说明重组goIFN-α蛋白能够在大肠杆菌中表达,大小符合预期且具有良好的反应原性,并成功制备出鼠抗goIFN-α血清。
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