| 牛病毒性腹泻病毒两种基因型双重RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 作者单位： | 达州职业技术学院,四川达州635001;开江县动物疫病预防控制中心,四川达州636250;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046;达州市动物疫病预防控制中心,四川达州635000;开江县动物疫病预防控制中心,四川达州636250;中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州730046 |
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| 基金项目： | 四川省科技计划;四川省科技计划;四川县域经济发展研究中心资助项目;西部之光"人才培养计划 |
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| 摘 要： | 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1(AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2(AF502399.1、MG436782.1、 AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5′-UTR保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立可同时检测BVDV-1和BVDV-2的双重RT-PCR方法。结果显示,该检测方法重复性好、特异性强,可分别检测出BVDV-1和BVDV-2核酸,与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;最低检测量为1×10~3拷贝/μL和1×10~2拷贝/μL;对达州及周边地区的332份临床样品进行检测,结果表明,该地区BVDV-1阳性率为7.83%,BVDV-2阳性率为0.90%,未检出BVDV-1和BVDV-2混合感染的临床样品。综上所述,建立的双重RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可用于BVDV的临床诊断和分子流行病学调查。
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| 关 键 词： | 牛病毒性腹泻病毒1型 牛病毒性腹泻病毒2型 双重反转录-聚合酶链反应 |
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