| 微小隐孢子虫E2F样结构域包含转录因子CpELD基因的原核和真核表达 |
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| 引用本文： | 陈宇,米荣升,龚海燕,程龙,王旭,韩先干,黄燕,陈兆国.微小隐孢子虫E2F样结构域包含转录因子CpELD基因的原核和真核表达[J].动物医学进展,2021,42(5):50-57. |
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| 作者姓名： | 陈宇 米荣升 龚海燕 程龙 王旭 韩先干 黄燕 陈兆国 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院上海兽医研究所,农业农村部动物产品质量安全生物性危害因子风险评估实验室,农业农村部动物寄生虫学重点实验室,上海200241 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.31702025);上海市科技兴农项目(No.2019-02-08-00-08-F01151);国家农产品质量安全风险评估计划项目(No.GJFP2019027);中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(No.2019JB13)。 |
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| 摘 要： | 为了实现微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)E2F样结构域包含转录因子编码基因cpeld的原核和真核表达,设计2对特异性引物,以C.parvum卵囊cDNA为模板,PCR扩增得到cpeld基因,将其分别插入pET32a和p3XFLAG-CMV14载体。同时设计引物,扩增微小隐孢子虫类钙调蛋白(C.parvum calmoduin-like proteins)的编码基因CpCML,插入pcmv-HA载体。将鉴定正确的重组质粒分别转入BL21(DE3)和293T细胞进行表达,Western blot观察重组蛋白的反应原性。结果显示,成功构建了重组原核表达质粒pET32a-cpeld和真核表达质粒p3XFLAG-CMV14-cpeld以及pcmv-HA-CML;SDS-PAGE显示,重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达出了分子质量约为55 ku的重组蛋白;Western blot分析显示,原核表达的重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体,真核表达重组CpELD和CpCML蛋白能分别与抗FLAG和HA单克隆抗体反应。结果表明,成功实现了cpeld基因的原核和真核表达以及CpCML基因的真核表达,表达产物具有良好的反应原性,为后续开展隐孢子虫CpELD和CpCML的功能和作用机制研究、新型的防控技术研发奠定了基础。
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| 关 键 词： | 微小隐孢子虫 cpeld基因 CpCML基因 原核表达 真核表达 |
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