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| 双峰驼FCGRT基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | |
| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 为制备抗双峰驼FcRn的抗体,首先从NCBI收录的双峰驼FCGRT基因序列中选取编码区,经跨膜结构和信号肽预测分析,截取不含信号肽的膜外序列并构建重组质粒pET-28a-FcRn,然后在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达及表达条件优化,用纯化后的FcRn重组蛋白免疫家兔,制备抗双峰驼FcRn的多克隆抗体,并通过间接ELISA和Western blot检测效价及其特异性。结果表明,获得的FcRn重组蛋白与预期大小一致(34 ku),且以包涵体形式表达,其最佳IPTG诱导浓度为0.3 mmol/L,诱导时间为6 h。ELISA检测抗体效价为1∶32 000,Western blot鉴定该抗体能与重组蛋白发生特异性结合。说明已成功制备了高效价和特异性良好的兔抗双峰驼FcRn多克隆抗体。 |
| 关 键 词： | 双峰驼 FCGRT基因 FcRn重组蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ | |