| 家蚕丝素P25蛋白的多克隆抗体制备与应用 |
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| 引用本文： | 张霖,刘春,谭祥,姜龙,胡文波,李伟,彭章川,夏庆友.家蚕丝素P25蛋白的多克隆抗体制备与应用[J].蚕业科学,2016,42(5). |
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| 作者姓名： | 张霖 刘春 谭祥 姜龙 胡文波 李伟 彭章川 夏庆友 |
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| 作者单位： | 家蚕基因组生物学国家重点实验室,西南大学,重庆400715;重庆市蚕丝纤维新材料工程技术研究中心,重庆400715;家蚕基因组生物学国家重点实验室,西南大学,重庆400715 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;家蚕基因组生物学国家重点实验室开放基金 |
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| 摘 要： | P25蛋白是家蚕(Bombyx mori)丝素蛋白的主要成分之一。根据BmP 25基因ORF序列设计引物,以家蚕5龄第3天丝腺cD NA为模板,RT-PCR扩增获得BmP 25的ORF全长片段。将构建的含BmP 25的原核表达重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)菌株感受态细胞,对家蚕丝素P25蛋白进行重组表达和纯化,并免疫家兔制备获得多克隆抗体,用于研究家蚕丝腺中P25蛋白的合成和分泌规律。利用制备的多克隆抗体对家蚕品种大造5龄第3天幼虫9个组织的总蛋白质样品进行Western blot检测,结果在中部丝腺和后部丝腺检测到P25蛋白,表明该抗体有较好的特异性。进一步利用此多克隆抗体分别对家蚕5龄第5天幼虫中部丝腺和后部丝腺不同区域进行荧光免疫组化分析,结果在后部丝腺的细胞和腔内观察到明显的荧光信号,而中部丝腺后部的细胞仅有微弱信号,腔内的荧光信号强度随着丝素蛋白的从后向前运输越来越弱,以致在中部丝腺的前部和中部未检测到荧光信号。推测可能是P25蛋白在丝素蛋白从溶胶状态到凝胶状态的转化过程中,被逐步包裹在丝素蛋白聚合物中导致其不能被检测到。利用该多克隆抗体对家蚕不同品种的茧丝蛋白进行Western blot检测,均能获得特异性的杂交条带,表明该抗体还可用于家蚕茧丝及丝制品的分子检测鉴定,为开发丝制品的检测试剂盒提供了条件。
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| 关 键 词： | 丝素蛋白 P25蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫印迹分析 荧光免疫组化 |
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