| 高通量提取西红柿基因组DNA方法探究及其在SNP分型中的应用 |
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| 引用本文： | 王海英,韩德俊,李晓蕊.高通量提取西红柿基因组DNA方法探究及其在SNP分型中的应用[J].中国农学通报,2023(9):45-51. |
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| 作者姓名： | 王海英 韩德俊 李晓蕊 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学园艺学院;2. 西北农林科技大学农学院;3. 西安高新区农业农村和水务局 |
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| 摘 要： | 随着植物分子生物学的发展，植物分子试验对于大规模样品DNA提取的需求越来越大。本研究旨在开发快速、简便、高通量的DNA提取技术。以西红柿叶片为试验材料，用96孔盒对西红柿叶片进行冷冻干燥及粉碎，基于改良的SDS提取DNA方法，采取排枪“两步加样一步抽提”，简化提取步骤，实现DNA的高通量提取。该方法提取DNA样品的平均浓度在138.6 ng/μL左右，满足一般性的PCR扩增要求；琼脂糖凝胶电泳结果显示绝大部分样品泳道可见清晰完整的DNA条带，无明显降解，并伴有少量的RNA污染。利用3个等位基因特异的定量PCR基因分型系统(AQP)分子标记对192个样本进行检测，结果显示3个标记的整体检测结果良好，均能有效区分样品间的不同等位基因位点。样品的有效荧光值占比在97%～99%之间，可以用于分子标记检测或遗传群体的基因分型。本研究在前人基础上探讨了一种简便、快速、高通量的西红柿基因组DNA提取方法，对于提取其他植物叶片组织DNA同样适用，并且该方法能够成功应用于AQP等其他类似的荧光分子标记检测，为大规模分子标记检测等实验DNA样品准备提供了借鉴。
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| 关 键 词： | 西红柿 改良的SDS方法 高通量提取DNA 琼脂糖凝胶电泳 AQP分子标记检测 |
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