| 牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 唐豪,贺泂杰.牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立[J].中兽医医药杂志,2023(4):31-35+97. |
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| 作者姓名： | 唐豪 贺泂杰 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃省动物疫病预防控制中心;2. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省中兽药工程技术研究中心 |
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| 摘 要： | 牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻，对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合，建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明，CPA体系Mg2+最佳物质浓度为2.0 mmol/L，甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度，60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原，层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线，未出现交叉反应。结果显示，CPA BCoV-N具有较高的特异性，CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器，简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增，封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染，对结果的判断更加直观客观，是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。
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| 关 键 词： | 牛冠状病毒 交叉引物扩增 快速检测 |
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