| SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用 |
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| 引用本文： | 钱林,李婷,鲜思美,曹熠,张友,徐松平,陈元翠,张益,包细明,饶体宇,吴伯梅.SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用[J].黑龙江畜牧兽医,2019(9). |
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| 作者姓名： | 钱林 李婷 鲜思美 曹熠 张友 徐松平 陈元翠 张益 包细明 饶体宇 吴伯梅 |
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| 作者单位： | 贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病研究所;贵州威宁自治县草地畜牧业发展中心 |
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| 摘 要： | 为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶消化后插入pVAX1真核表达载体中,构建B2L-F1L融合基因表达质粒,再转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,对真核表达质粒进行PCR鉴定、双酶切鉴定及序列测定。结果表明:利用SOE-PCR技术成功扩增出B2L-F1L融合基因;对真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L进行PCR鉴定和双酶切鉴定后,均可得到与预期大小一致的DNA片段;测序发现,真核表达质粒目的基因序列与预期设计一致。说明真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L构建成功。
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