血清3型鸭甲型肝炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用 |
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引用本文: | 孙庆歌.血清3型鸭甲型肝炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J].中国兽药杂志,2013,47(4):1-5. |
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作者姓名: | 孙庆歌 |
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作者单位: | 武汉中博生物股份有限公司;中国农业大学动物医学院人畜共患病农业部重点开放实验室,北京海淀 |
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摘 要: | 通过对GenBank公布的鸭甲型肝炎病毒全序列比对,在3型鸭甲肝炎病毒(DHVA-3)5’非编码区的保守区,设计了一对检测引物和一条特异性TaqMan探针,以构建的阳性重组质粒经体外转录合成的RNA作为标准品绘制标准曲线,建立了一种快速检测DHAV-3的实时荧光定量RT—PCR方法。该方法能特异性地检测出DHAV-3,而与血清1型鸭肝炎病毒(DHAV-1)、鸭瘟病毒、新城疫病毒、禽流感病毒(H9)、呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒无交叉反应。在1.8×10^3~1.8×10^8copies/μL的检测范围内标准曲线线性关系较好,R2为0.992。敏感性试验表明,最低检测限为36拷贝数RNA。用该方法和胚半数致死量法对尿囊液中病毒含量进行检测,表明二种方法检测结果呈正相关。本研究所建立的检测方法特异性好,灵敏度高,且操作方便,可为该病毒的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。
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关 键 词: | 血清3型鸭甲型肝炎病毒 实时荧光定量RT—PCR |
收稿时间: | 2012/10/10 0:00:00 |
修稿时间: | 2013/2/21 0:00:00 |
Establishment and application of real-timeRT-PCR to detect Duck hepatitis A virus serotype 3 |
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Institution: | Wuhan Chopper Biology Co,Ltd;China;Key Laboratory of Zoonosis of Ministry of Agriculture,College of Veterinary Medicine,China Agricultural University;China |
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Abstract: | |
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Keywords: | Duck hepatitis A virus serotype 3 real-time RT-PCR |
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