| 牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库构建与筛选 |
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| 引用本文： | 丁金花,李启峰,马旭升,肖红冉,肖盛中,吴鹏,盛金良,陈创夫.牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库构建与筛选[J].动物医学进展,2018(5). |
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| 作者姓名： | 丁金花 李启峰 马旭升 肖红冉 肖盛中 吴鹏 盛金良 陈创夫 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;天康生物股份有限公司;石河子大学生命科学学院 |
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| 摘 要： | 旨在获得牛病毒性腹泻病毒(BVDV)特异性纳米抗体。通过用BVDV-E0重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞。利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与BVDV-E0蛋白结合的噬菌体,对所得VHH序列进行测序和基因比对。用ELISA筛选出抗BVDV-E0的高亲和力纳米抗体,并验证纳米抗体的亲和力和活性。结果成功构建了插入率为86%、库容量为1.3×1011 cfu的噬菌体表达文库,经过筛选获得5个BVDV-E0阳性单克隆,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的BVDV-E0纳米抗体,经亲和力的鉴定获得2个不同的高亲和力的VHH基因,并且能结合人工抗原E0,还能够被竞争抗体所阻断。研究结果为用于组装检测BVDV试剂盒和研制BVDV疫苗奠定了基础。
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