| 绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈云蕾,袁力明,李娜,马亚茹,徐锦凤,赛务加甫.绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定[J].动物医学进展,2018(5). |
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| 作者姓名： | 陈云蕾 袁力明 李娜 马亚茹 徐锦凤 赛务加甫 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;石河子大学生命科学学院 |
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| 摘 要： | 构建并筛选针对干扰绵羊NYD-SP27基因的shRNA慢病毒载体。使用RNAi Target Sequence Selector软件设计并合成针对绵羊NYD-SP27基因的4条shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及1条阴性对照序列(NC),分别将其连接到载体pLentiLox3.7(PLL3.7)中,得到4个shRNA干扰载体NYDSP27-shRNA及1条阴性对照载体NC-shRNA,同时将构建好的干扰载体及辅助质粒瞬时共转染至HEK-293FT细胞中,收集病毒液纯化后感染SP27-21细胞,48h后用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NYD-SP27相对表达量,将干扰效果最好的载体用于进一步的研究中。结果表明,构建了重组慢病毒干扰载体,并成功包装成干扰慢病毒NYDSP27-shRNA-LV以及用来感染BHK-SP27-21细胞,48h后用实时定量PCR筛选出高效干扰绵羊NYD-SP27的片段NYDSP27-shRNA-1。为进一步研究NYD-SP27基因表达下调对绵羊精子发育的影响奠定了基础。
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| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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