| 土壤蜡蚧轮枝菌DNA提取方法的改进及其应用效果 |
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| 引用本文： | 周洁,张艳军,谢明,贾开志.土壤蜡蚧轮枝菌DNA提取方法的改进及其应用效果[J].中国生物防治学报,2014(6):828-833. |
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| 作者姓名： | 周洁 张艳军 谢明 贾开志 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室/农业部生物防治重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家“863”计划(2011AA10A204);国家自然基金(31201571);国际合作项目(2011G4;2012DFR30810);公益性行业(农业)科研专项(201503114);中国农科院创新工程;转基因专项(2009ZX08011-028B) |
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| 摘 要： | 土壤真菌分子生态学研究需要大量和高效地提取真菌的DNA。应用市售的一般试剂盒提取土壤虫生真菌DNA,常常存在得率和质量低的问题,甚至根本提取不到土壤真菌的DNA样品。针对这一问题,本研究对细胞破碎方式及后续DNA提取参数进行了一系列的改进和优化,建立了一套针对性的提取方法。该提取法对虫生真菌—蜡蚧轮枝菌纯培养物的灵敏度极高,可在10个孢子的条件下提取到DNA,而市售的试剂盒则不能提取到(试剂盒在107个孢子条件仍提不到DNA);该提取法对人工投菌土样的DNA提取灵敏度达到102个孢子/克土,所得的DNA纯度高,无明显抑制后续PCR扩增的物质;施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得DNA样品可成功扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段,而未施用过蜡蚧轮枝菌的田间土样所得DNA样品不能扩增出蜡蚧轮枝菌特异片段。本提取方法具有灵敏度和纯度高的特点,适用于土壤虫生真菌的分子生态学样品制备。
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| 关 键 词： | 蜡蚧轮枝菌 DNA提取 PCR 虫生真菌 |
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