| 猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR的建立与应用 |
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| 引用本文： | 姚俊.猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR的建立与应用[J].中国动物传染病学报,2012,20(6):68-76. |
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| 作者姓名： | 姚俊 |
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| 作者单位： | 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,昆明,650224 |
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| 基金项目： | 云南省自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 为了建立一种既能检测野毒,又能检测疫苗毒的猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法,经过对GenBank中所有瘟病毒属成员高度保守的5’端非翻译区序列比对分析后,设计出1对TaqMan Real-time RT-PCR引物、1条TaqMan探针和3条RNA标准品制备引物。猪瘟病毒石门毒株经RNA标准品制备引物RT-PCR扩增后,再经T7 RNA聚合酶体外转录制备包含检测目的片断序列的猪瘟病毒RNA标准品。通过最佳引物、探针浓度的筛选及反应条件的优化,建立了猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法批内及批间重复试验变异系数均低于2%,特异性试验仅能检测出猪瘟强毒及疫苗毒株,最低浓度检测极限为1 X 102 copies/μL,上机检测时间少于60 min,建立的标准曲线斜率(Slope)为:-3.97,截距(Intercept)为:47.41,相关系数(R2)为:0.999779。运用该方法对3份猪瘟临床组织样品及6家企业生产的5种细胞苗及2种脾淋苗进行定量检测,结果提示:临床病料含有的病毒拷贝数差异不大,而疫苗产品每头份含有的病毒拷贝数差异较大。所建立的方法具有特异、快速、灵敏、可重复性和线性关系好的特点,不仅适合于猪瘟临床样品的早期检测,也适用于疫苗生产过程中的质控及疫苗制品的效价评估。
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| 关 键 词： | 猪瘟病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 建立 应用 |
DEVELOPMENT AND APPLICATION OF TAQMAN REAL-TIME RT-PCR FOR CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS |
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| YAO Jun.DEVELOPMENT AND APPLICATION OF TAQMAN REAL-TIME RT-PCR FOR CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS[J].Chinese Journal of Animal Infectious Diseases,2012,20(6):68-76. |
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| Authors: | YAO Jun |
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| Institution: | YAO Jun(Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Diseases laboratory,Animal Science and Veterinary Institute,Kunming 650224,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Classical swine fever virus(CSFV) TaqMan Real-time RT-PCR vaccine |
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