| 美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析 |
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| 引用本文： | 刘子欢,赵丹,常梦颖,张雅昆,徐畅,陆秀君,郭巍.美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析[J].蚕业科学,2019,45(1):24-31. |
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| 作者姓名： | 刘子欢 赵丹 常梦颖 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍 |
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| 作者单位： | 河北农业大学植物保护学院,河北保定071001;黄骅港海关,河北沧州061113;河北农业大学植物保护学院,河北保定,071001;河北农业大学植物保护学院,河北保定071001;河北省核桃工程技术研究中心,河北保定071001 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系建设专项;河北省自然科学基金;河北省山区核桃近自然生产技术创新与示范项目 |
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| 摘 要： | 美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647)。该基因开放阅读框为3 000 bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp34～Asp_( 527)和Leu563～Gln925的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu563～Gln925之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。
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| 关 键 词： | 美国白蛾 氨肽酶N Bt蛋白 配体印迹 |
Gene Cloning of Hyphantria cunea Midgut Aminopeptidase N and Its Binding Characteristics with Three Bacillus thuringiensis Toxins |
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| Liu Zihuan,Zhao Dan,Chang Mengying,Zhang Yakun,Xu Chang,Lu Xiujun,Guo Wei.Gene Cloning of Hyphantria cunea Midgut Aminopeptidase N and Its Binding Characteristics with Three Bacillus thuringiensis Toxins[J].Acta Sericologica Sinica,2019,45(1):24-31. |
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| Authors: | Liu Zihuan Zhao Dan Chang Mengying Zhang Yakun Xu Chang Lu Xiujun Guo Wei |
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| Institution: | (College of Plant Protection,Agricultural University of Hebei,Baoding Hebei 071001,China;Research Center of Walnut Engineering and Technology of Hebei,Baoding Hebei 071001,China;Huanghua Port Customs,Cangzhou Hebei 061113,China) |
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| Abstract: | Liu Zihuan;Zhao Dan;Chang Mengying;Zhang Yakun;Xu Chang;Lu Xiujun;Guo Wei(College of Plant Protection,Agricultural University of Hebei,Baoding Hebei 071001,China;Research Center of Walnut Engineering and Technology of Hebei,Baoding Hebei 071001,China;Huanghua Port Customs,Cangzhou Hebei 061113,China) |
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| Keywords: | Hyphantria cunea Aminopeptidase N Bt protein Ligand blot |
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